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免提取DNA,轻松搞定基因分型

2020-09-28 908

基因分型是通过使用生物学试验检查个体的DNA序列的过程,也是将目标序列与另一个体的序列或参考序列进行比较来确定个体的遗传构成(基因型)差异的过程。


PCR 是一种常见的基因分型方法,用于对样本的基因型进行扩增和鉴定。但由于基因分型通常需要检测成百上千份样品,样品处理、提取基因组DNA、PCR扩增目的基因的工作量使得基因分型PCR非常耗时,因此,我们提供了几个简单的PCR优化方法,帮助您克服基因分型中的常见障碍。


01省略基因组DNA提取

传统做法是从组织样品中纯化基因组DNA进行基因分型PCR。即使使用快速提取试剂盒,该过程也可能至少需要0.5-1小时,并需要使用离心机和加热等实验室专用设备。使用到的提取试剂还需要相应的处理,需要较多的实验时间和实验成本。

1-1传统方法.jpg

采用直接PCR试剂盒,可以将组织样本直接用于PCR反应扩增,无需进行DNA纯化,也无需使用特殊设备和进行其他试剂处理。直接PCR使用原始样品(例如鼠尾、鼠耳或毛囊发)进行简单裂解即可进行PCR实验,可节省大量时间。裂解后的样品还可以低温长期保存,以便进行后续其他实验。

1-2直接PCR方法.jpg


02使用PCR预混液减少配制时间和污染

预混为2×Mix的产品包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液等PCR所需的成分,使用时仅需加入DNA模板和引物即可进行扩增,降低了PCR 实验配置出错、试剂污染等的风险,也节省实验时间。

3-加引物.jpg


03缩短PCR反应时间

以下三个方面缩短 PCR 反应时间:

  • 使用快速PCR酶,可以以15-30 sec/kb的速度合成DNA(替代传统的60 sec/kb)的酶。

  • 结合使用快速PCR仪,例如可以快速升高或降低至所需循环温度的PCR仪。

  • 选择仪器适用的“快速”耗材产品,低容的耗材高度更低,减少了蒸发的影响并提高热传导效率,而薄壁PCR管可实现更好的热传递。


04扩增后PCR 产物直接上样电泳

传统的PCR产物检测方法是在电泳之前,将PCR产物与一定比例的含染料的上样缓冲液混合后上样到凝胶孔。这个过程看似微不足道,但涉及到计算所需体积、制备上样染料、吸取PCR样品,最后进行混合。这些步骤需要时间及额外的耗材。而选择使用含染料的直接PCR 预混液可省略这些步骤,扩增完成后直接上样进行电泳检测。

5-合成电泳图.jpg

05选择通用性预混液

麦伯生物提供的Magic Direct PCR Mix是已含染料的直接PCR预混液,可耐受植物中的多糖多酚、全血、血清、血浆中的肝素、高浓度的血红蛋白、甘油三脂、乙醇、胍盐、SDS等强PCR抑制剂,适用于血液、动物组织、植物叶片、种子、果实等多种样本的直接PCR扩增,让您无需重新选择和采购试剂即可进行多种样本的分型实验,高效、快速、方便。

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